分(fèn)光光度計採用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源 ，通過系列分(fèn)光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源 ，光源透過測試的樣品後，部分(fèn)光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化(huà)成樣品的濃度 。樣品的吸光值與(yǔ)樣品的濃度成正比。
　　
　　核酸的定量
　　
　　核酸的定量是分(fèn)光光度計使用頻率高的功能
。可以定量溶於(yú)緩衝液的寡核苷酸，單鏈 、雙鏈DNA ，以及(jí)RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分(fèn)子構(gòu)成不一 ，因此其(qí)換(huàn)算系數不同(tóng) 。定量不同(tóng)類型的核酸，事先要選擇對應的系數 。如 ：1OD的吸光值分(fèn)別(bié)相當於(yú)50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig 。
　　
　　測試後的吸光值經過上(shàng)述系數的換(huàn)算，從而得出相應的樣品濃度 。測試前，選擇正確的程(chéng)序 ，輸入原液和稀釋液的體積 ，爾(ěr)後測試空(kōng)白液和樣品液。然而 ，實驗(yàn)並非(fēi)一帆風順。讀數不穩定可能是實驗(yàn)者頭(tóu)痛的問題 。靈敏度越高的儀(yí)器，表現出的吸光值漂移(yí)越大。
　　
　　事實上(shàng)，分(fèn)光光度計的設計原理和工作原理，允許吸光值在一定範圍內變(biàn)化(huà)，即儀(yí)器有一定的準確度和度 。如EppendorfBiophotometer的準確度≤1.0%（1A） 。這樣多次測試的結果(guǒ)在均(jūn)值1.0%左右之間(jiān)變(biàn)動(dòng) ，都是正常的 。
　　
　　另外 ，還需考慮核酸本身物化(huà)性質和溶解核酸的緩衝液的pH值 ，離(lí)子濃度等(děng)：在測試時，離(lí)子濃度太高，也會(huì)導致讀數漂移(yí)，因此建議使用pH值一定 、離(lí)子濃度較低的緩衝液 ，如TE，可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同(tóng)樣是不可忽視(shì)的因素 ：由於(yú)樣品中不可避免存在一些(xiē)細小的顆粒(lì)，尤其(qí)是核酸樣品 。
　　
　　這些(xiē)小顆粒(lì)的存在干擾測試效果(guǒ) 。為了(le)大程(chéng)度減少顆粒(lì)對測試結果(guǒ)的影響 ，要求核酸吸光值至少大於(yú)0.1A，吸光值在0.1-1.。在此範圍內 ，顆粒(lì)的干擾相對較小 ，結果(guǒ)穩定 。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計的測試範圍）。後是操作因素，如混合要充分(fèn)，否則吸光值太低 ，甚至出現負值 ；混合液不能存在氣(qì)泡 ，空(kōng)白液無懸浮物 ，否則讀數漂移(yí)劇烈 ；必須使用相同(tóng)的比色杯測試空(kōng)白液和樣品 ，否則濃度差異太大；換(huàn)算系數和
　　
　　樣品濃度單位選擇一致；不能採用窗口磨損的比色杯 ；樣品的體積必須達到比色杯要求的小體積等(děng)多個操作事項 。