分光光度(dù)計的基本工(gōng)作原理是(shì)基於(yú)物質對(duì)光（對(duì)光的波長(zhǎng)）的吸(xī)收具有(yǒu)選擇性，不同的物質都有(yǒu)各自的吸(xī)收光帶，所以 ，當光色散後(hòu)的光譜通過(guò)某一溶液時 ，其(qí)中(zhōng)某些波長(zhǎng)的光線就(jiù)會被溶液吸(xī)收 。在一定的波長(zhǎng)下(xià) ，溶液中(zhōng)物質的濃度(dù)與光能(néng)量減弱的程(chéng)度(dù)有(yǒu)一定的比(bǐ)例關係 ，即符合比(bǐ)爾定律。　　
　　分光光度(dù)計的構(gòu)造
　　
　　分光光度(dù)計允許的測定波長(zhǎng)範圍在360～800nm ，其(qí)構(gòu)造比(bǐ)較簡單(dān)，測定的靈敏度(dù)和精(jīng)密度(dù)較高(gāo)。因此，應用比(bǐ)較廣(guǎng)泛(fàn) 。721型分光光度(dù)計的儀器構(gòu)造見下(xià)圖。
　　
　　從光源燈(dēng)發(fā)出的連續輻射光線，射到聚光透鏡上，會聚後(hòu)，再經過(guò)平面鏡轉角90° ，反射至入射狹縫 。由此入射到單(dān)色器內 ，狹縫正好位(wèi)於(yú)球面准直物鏡的焦面上 ，當入射光線經過(guò)准直物鏡反射後(hòu) ，就(jiù)以一束平行(xíng)光射向稜鏡 。光線進入稜鏡後(hòu)，進行(xíng)色散 。色散後(hòu)回來的光線 ，再經過(guò)准直鏡反射 ，就(jiù)會聚在出光狹縫上，再通過(guò)聚光鏡後(hòu)進入比(bǐ)色皿，光線一部分被吸(xī)收，透過(guò)的光進入光電管 ，產生相應的光電流，經放大後(hòu)在微安表上讀出 。
　　
　　分光光度(dù)計的使(shǐ)用方法
　　
　　①首(shǒu)先接通電源，打開電源開關1 ，指示燈(dēng)亮 ，打開比(bǐ)色皿暗箱蓋8 ，預熱20分鐘。
　　
　　②波長(zhǎng)選擇旋鈕(niǔ)6，選擇所需的單(dān)色光波長(zhǎng)，用靈敏度(dù)旋鈕(niǔ)2選擇所需的靈敏檔 。
　　
　　③放入比(bǐ)色皿，旋轉零位(wèi)旋鈕(niǔ)5調零 ，將比(bǐ)色皿暗箱蓋合上 ，推進比(bǐ)色皿拉桿3 ，使(shǐ)參比(bǐ)比(bǐ)色皿處於(yú)空白校正位(wèi)置(zhì) ，使(shǐ)光電管見光，旋轉透光率調節旋鈕(niǔ)4，使(shǐ)微安表9指針準確處於(yú)。按上述方法連續幾次調整零位(wèi)和位(wèi) ，即可(kě)進行(xíng)測定工(gōng)作 。
　　
　　分光光度(dù)計使(shǐ)用和維(wéi)護中(zhōng)應注意事項 ：
　　
　　①連續使(shǐ)用儀器的時間不應超過(guò)2小時，是(shì)間歇0.5小時後(hòu)，再繼續使(shǐ)用。
　　
　　②比(bǐ)色皿每次使(shǐ)用完畢後(hòu) ，要用去離子水洗淨(jìng)並倒置(zhì)晾乾後(hòu) ，存放在比(bǐ)色皿盒內 。在日(rì)常使(shǐ)用中(zhōng)應注意保護比(bǐ)色皿的透光面，使(shǐ)其(qí)不受損壞或產生划痕 ，以免影響透光率。
　　
　　③儀器不能(néng)受潮。在日(rì)常使(shǐ)用中(zhōng)，應經常注意單(dān)色器上的防(fáng)潮硅膠(jiāo)（在儀器的底部）是(shì)否變色 ，如硅膠(jiāo)的顏色已變紅 ，應立(lì)即取出烘(hōng)乾或更換(huàn)。
　　
　　④在托運或移動儀器時，應注意小心(xīn)輕放 。